第033章 -邪魅狂狷慕小呆

253.8：别离用sds-page和等电堆积测定蛋白质的大小和pi；利用northern印迹和rn印迹检测它是否在肝细胞中表达；利用x射线衍射或nmr测定它的三级布局。

至于某些巯基蛋白酶上的cys和ser代替今后仍然有活性，能够恰好它的活性中间本来含有his和asp，能与引进的ser构成催化三元体。

4.5：

3：hanes-wolff作图，它以[s]/v对[s]的作图，制止了v偏差对横轴的影响，以是比拟双倒数法和eadie-作图法s-wolff作图的偏差最小。

3.3：不成以。胶原三股螺旋是在胶原蛋白处在前体（前胶原）状况下折叠而成的，在折叠好今后即落空一段氨基酸序列，导致一级布局产生窜改，是以如果将已折叠好的胶原蛋白变性，就很难复性。

7.8：变性后的dna浮力密度上升，是以位置将下移。

3：野生分解或者用体外转录的体例获得核糖核酸酶p中的rna，如答应以制止蛋白质的净化，再看其有没有催化活性。

思虑题（p253-254）：第9，11，12，13题。

9章：q3，4,5,8

4：实际上，亲水的氨基酸残基都能够产生磷酸化润色。

4：按照rna天下的假说，应当起首寻觅这个星球上有无rna。

6.9:按照暗码子和反暗码子配对遵循反平行原则以及写碱基序列要遵循从5到3的方向，别的ψ为假尿苷，与a配对，不可贵出gψc辨认的暗码子序列应当是gac。

1.4：如果选用阴离子互换层析，asp,lys和ala在ph6的低盐缓冲溶液下上柱，那么带负电荷的asp将被吸附在树脂上，而带正电荷的lys和净电荷为零的ala将直接呈现在流出液中，asp会在随后的高盐缓冲溶液洗脱中获得，如许就实现了asp与lys和ala的分离。如果还需求将lys和ala分开，能够将汇集到的直接流出液再停止阳离子互换层析。

第十章：

5：实际上，任何亲水氨基酸都能够，因为它们的侧链基团具有化学反应性。

基团特同性按捺剂能共价润色活性中间的特定氨基酸残基，只在乎活性中间有无能被润色的氨基酸残基，而不在乎活性中间的三维布局是甚么，故起感化的特同性最低。

2.11：第一应当是无益于构成a-螺旋的氨基酸；第二侧链应当是含有氢键供体或受体的氨基酸，如许无益于通过氢键去辨认并连络特定的碱基序列；第三最好侧链带正电荷或不带负电荷，如许无益于和磷酸骨架的连络。合适这几个前提的氨基酸有lys,arg,gln,asn和tyr。

第八章：

8：h越大，正协同性就越强，别构激活剂的感化使得反应体系中更多的酶变成了r态，不再需求底物的激活，是以别构激活剂的存在可导致别构酶正协同性的降落，而别构按捺剂恰好相反，是以别构激活剂减少h，别构按捺剂提□□。

8章：quiz2

6：广义的酸碱催化，共价催化特有的阴离子穴对碳四周体过渡态的稳定。阴离子穴对碳四周体过渡态的稳定进献最大。

9：应当是胰蛋白酶按捺剂，因为其他两种蛋白酶是由胰蛋白酶激活而从酶原窜改成酶的

3：比较在非变性凝胶和sds-凝胶上电泳的成果，看条带有无窜改。

第五章:

4：不成逆性按捺使酶有效浓度降落而导致vmax的降落，但并不影响酶与底物的亲和力，既不影响km，以是其动力性特性近似于非合作性按捺。

2.6：呈现在两相界面的氨基酸残基起首不该该是粉碎螺旋的氨基酸残基，其次这类氨基酸的侧链比较大，并具有两亲性子――一个部分亲水，另一部分疏水。明显tyr和lys具有如许的性子。

1：乙醇脱氢酶可通过nadh在光接收的窜改来直接测定其活性；逆转录酶可通过测定放射性标记的dntp参入dna带来的放射性窜改来测定；蛋白质激酶则通过[γ-32p]-atp转移到被磷酸化润色的蛋白质的放射性窜改来测定。

7.3：糊口在南极的微生物在基因组的一级布局上会含有更多的at碱基对，三级布局为负超螺旋，糊口在火山口的微生物在基因组的一级布局上应含有更多的gc碱基配对，三级布局很能够是正超螺旋，如答应以保持其基因组dna在高温环境下的稳定。

7.4：atatatatatat的均一性高，及庞大度更低，在复性的时候很轻易找到互补链上的序列而重新配对。

5：胰蛋白酶，因为其他蛋白酶是受胰蛋白酶的感化而激活的。

第十一章：

先防盗一下，过会儿替代。

253.3：在人类，2,3-bpg稳定脱氧血红蛋白，而鳄鱼贫乏这类机制，但它的血红蛋白喜好连络hco3ˉ，而导致脱氧的构思被引诱，因而高浓度的co2正如人体内的bpg一样稳定脱氧血红蛋白，并且，hco3ˉ的连络留下h有助于再连络血红蛋白，降落ph。是以，跟着co2的产生，氧气开释。

11：辅酶与酶连络的比较安稳，难以用暖和的体例（如透析和超滤）将其分离出来，而辅酶则不然。含有腺苷的辅酶或辅基有：辅酶i，辅酶ii，fad和coa。这可作为rna天下假说的一个证据。

11章：q1，3,4

7：一个游离的cys巯基的pka为8.4，但在蛋白质分子中一样的巯基因为所处的微环境分歧而不同很大，从5到10不等。巯基蛋白酶的催化效力明显与巯基的亲核才气的强弱有关。而巯基的亲核才气与其是否离子化（落空质子，解离）有关，pka越低，越轻易产生解离。是以，分歧的巯基蛋白酶的最适ph取决于其活性中间的巯基的pka。

第十二章：

10章：q4，6,7

253.15：糊口在南极的微生物的基因组dna富含at碱基对，并构成负超螺旋，因为如许无益于在高温下dna的解链；而糊口在热泉中的微生物的基因组dna应富含gc碱基对，并且能够构成正超螺旋，因为这有助于在高温环境下基因组dna的稳定。

1：还存在于统统生物体内的天然核酶有核糖核酸酶p和核糖体；还存在于统统真核生物体内的核酶有u6-snrna。

5：因为这两种按捺剂对酶活性中间布局的特同性要求最高，即感化的挑选性最强，利用它们作为引物引发的副感化最低。

13章：q1，3，5

12章：q4，5,7

253.16：负超螺旋dna和正超螺旋dna别离是dna两条链缠绕不敷和过分缠绕引发的，而核酸酶s1专门水解单链核酸，故当将共价闭环负超螺旋dna与核酸酶s1保温在一起的时候，因为负超螺旋共价闭环dna在溶液里与含有部分化链的败坏型dna之间存在均衡，核酸酶s1将水解败坏型dna上产生解链的单链部分，产生缺口，并进一步促使均衡向败坏型倾斜，颠末一段时候后，统统的负超螺旋dna都窜改成线形的双链dna。但是正超螺旋dna不会构成带有单链地区的败坏型dna，故它的布局稳定。

第十三章：

253.6:（1）,phe,trp,val或tyr（2）疏水性（3）hsp与它们的连络，禁止了蛋白质分子之间通过疏水侧链之间的连络构成沉淀而伤害细胞。

第九章：

7：水解激活，天然过渡态近似物在分泌胰蛋白酶的细胞内制止胰蛋白酶的提早激活和serpin作为按捺蛋白对它的按捺。

1.3：tyr的等电点是（2.29.1）/2=5.65，cys的等电点是（2.08.4）/2=5.2

2.12：遴选一种药物可结归并能稳定的螺旋布局，禁止他们碰到今后产生构象窜改。

思虑题（p253-254）：第9，11，12，13题。

4：肯定靠近多肽底物连络位点的氨基酸残基性子，看有无催化三元体的存在；测定一级布局，和已知的丝氨酸蛋白酶停止比对，考查同源性；停止一系列ph窜改的动力学尝试，以肯定关头氨基酸残基的pka；利用丝氨酸蛋白酶特同性按捺剂和过渡态近似物按捺剂；还能够利用亲和标记，化学润色和定点突变等尝试。

2.5：（4）最稳定，因为这类a-螺旋n-端和c-端各有负电荷和带正电荷的侧链基团，可有效地中和由螺旋偶极矩带来的在n-端和c-端的正电荷和负电荷；（3）最不稳定，因为这类a-螺旋n-端和c-端各有正电荷和带负电荷的侧链基团，不但不能中和由螺旋偶极矩带来的在n-端和c-端的正电荷和负电荷，反而增加了两端所带有的电荷、

253.2：这三种效应都无益于hb在氧分压和ph低的时候将连络的氧气开释给外周构造这对hb运输氧气的服从相称首要，但他们都是建立在hb具有四级布局的根本之上的，因为mb只由一条肽链构成，无四级布局，是以不成能具有这三种效应；别的，mb的服从是为肌细胞储存氧气，故也不需求具有这三种效应。

2：his侧链的pka靠近心机ph，使其很轻易作为质子供体或受体而参与酶化。